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[NanoTemper] FAQ : Adsorption of biomolecules to surfaces

작성자 : 관리자

작성일 : 2024. 02. 23

FAQ : Adsorption of biomolecules to surfaces

단백질과 같은 생물분자의 비특이적인 흡착은 생물분자의 외부에 있는 전하가 있는 잔기 또는 hydrophobic patches와 캐피러리의 유리 표면 또는 반응 튜브의 상호 작용에 의해 일어납니다. 어떤 흡착이든 물질 손실을 일으키므로 방지되어야 합니다.

실험용품에 흡착 : 타겟 및/또는 리간드의 흡착은 일반적인 형광 손실 또는 ligand-dependent fluorescence change로 나타납니다. 아래 개선책을 참조하십시오.

캐피러리 벽에 흡착 : 최상의 MST 결과를 얻기 위해 캐피러리 벽에 비특이적인 흡착을 방지해야 합니다. 왜냐하면 결합 특이성이 변경되거나 MST 신호가 변경되거나 결합 실험에서 가짜 양성 신호가 발생할 수 있기 때문입니다. 아래의 개선책을 참조하십시오. 캐피러리 벽에 형광 타겟 분자의 흡착은 캐피러리 지름을 따라 형광 프로필을 반영하는 "Capillary Shape"를 기반으로 식별할 수 있습니다.

[흡착하는 및 흡착하지 않는 분자의 캐피러리 형태 분석]
전반적인 흡착 정도가 낮고 타겟 분자의 결합 및 미결합 상태에서 시간이 지나도 일정하며 동일한 경우 흡착은 무시할 수 있습니다.

실험용품 흡착 시 권장 사항:
• 0.005-0.05% Tween 20 또는 0.1% Pluronic F-127과 같은 detergents 또는 BSA(0.5-1 mg/ml) 또는 PEG 8000(0.1%)과 같은 passivating agents를 분석용 버퍼에 첨가
• Low-binding tubes 또는 non-binding MTP를 사용

캐피러리 흡착 시 권장 사항:
• 단백질 흡착을 억제하는 수단으로 Premium Capillary 사용, Tween 20 또는 Pluronic F-127과 같은 detergents, 또는 PEG 8000과 같은 다른 amphiphilic polymer additives 사용
• 경우에 따라 BSA와 같은 blocking proteins이 유용
• 표면 흡착이 지속되는 경우 20mM Arginine 또는 Proline과 같은 안정화 아미노산 테스트
• 단백질 흡착은 캐피러리 벽과 생물분자 간의 전하-전하 상호작용에 의해 발생할 수 있습니다. 따라서 salt (최종 농도 150 mM NaCl, KCl 또는 equivalent salts)를 첨가하거나 버퍼의 pH 값을 ± 0.5 단위로 약간 변경하여 흡착을 방지하는 데 도움이 될 수 있습니다.
• Poly-lysine 또는 spermidine과 같은 전하가 있는 폴리머들의 추가는 생물분자와 캐피러리 간의 전하-전하 상호작용을 방해할 수 있습니다.
• 흡착과 함께 단백질 응집이 관찰되는 경우 응집체를 먼저 제거하는 것이 권장됩니다. 왜냐하면 응집된 생물분자는 표면 흡착이 쉽게 일어나기 때문입니다.
• 캐피러리에 DNA 또는 RNA 분자의 흡착을 극복하기 위해 MST-버퍼 대신 PBS 사용

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